Ответ:
Увидеть ниже…
Объяснение:
Ферменты рестрикции разрезаны по определенным последовательностям, поэтому необходимо использовать один и тот же фермент рестрикции, поскольку он будет давать фрагменты с одинаковыми комплементарными липкими концами, что позволит образовывать связи между ними.
Существуют определенные совместимые сайты рестрикции, которые можно использовать вместе. Xho1 и Sal1 являются примерами. Их липкие концы совпадают, и поэтому их можно соединять вместе. Но лигирование убивает оба сайта Xho1 и Sal1, поэтому вы не можете использовать ни один из них для повторного разрезания (в местах лигирования).
Вы также можете использовать экзонуклеазу или ПЦР, чтобы сделать наиболее липкие концы (5
или 3
нависает) в тупые сайты - таким образом, вы можете переместиться в тупой вырезанный сайт - но это, как правило, также убивает тупой сайт.
Какой фермент необходим для создания копий ДНК из РНК?
Обратная транскриптаза Обратная транскриптаза - это фермент, обнаруженный в природе в ретровирусах, который действует как катализатор в транскрипции ретровирусной РНК в ретровирусную ДНК. Однако это не нормальная ДНК, а уникальный тип, известный как комплементарная ДНК (кДНК). Обнаружение обратной транскриптазы в вирусах позволило приложению конструировать кДНК из РНК. РНК извлекается из нужной клетки и помещается в аппарат для ПЦР (полимеразной цепной реакции). Фермент добавляется вместе с праймерами и свободными нуклеотидами. Оптимальная активность фермента и максимальная кДНК достигаются при 42–48 ° C.
PBR322 представляет собой плазмиду, имеющую два сайта рестрикции для EcoRI, в то время как ДНК фага Т4 имеет три сайта рестрикции для нее. Эти две ДНК обрабатывали EcoRI и давали работать на агарозном геле. Какой рисунок будет получен на геле?
Неверный вопрос, T4 имеет около 40 сайтов для EcoR1, а не 3 ... pBR322 имеет только 1 сайт для EcoR1, между геном фактора устойчивости к AMP и геном TET-гена ... T4: (спасибо, Springer Verlag!) Изображение взято с http://link.springer.com/article/10.1007/BF00272920 © Springer-Verlag 1981 Но, если ваш вопрос более гипотетический: геномы pBR322 и T4 являются круглыми, поэтому: pBR322: 2cuts = 2 фрагменты, T4: 3cuts = 3 фрагмента. Работая на агарозном геле, вы увидите 2 полосы в полосе pBR, 3 полосы в полосе T4, если 2 или более фрагмента имеют одинаковый размер или близки к нему. , В этом случае они мигрируют более или
Почему вы должны использовать один и тот же фермент рестрикции на ДНК клетки и на плазмиде?
Эндонуклеаза рестрикции идентифицирует и обрезает одну и ту же паллиндромную последовательность как в ДНК, так и в векторе, благодаря чему, когда они будут смешаны, их комплементарные основания объединятся, и это будет образовывать р-ДНК. Если оба будут разрезаны с разными RE, то при смешивании они не будут лигировать друг с другом, поскольку их базы не будут совпадать.