Почему ДНКазы и лизоцим на стадиях лизиса используются во время очистки белка?

Почему ДНКазы и лизоцим на стадиях лизиса используются во время очистки белка?
Anonim

Ответ:

Для очистки белковой фракции …

Объяснение:

Если вы очищаете (часто специфический) белок, вам нужно избавиться от как можно большего количества мусора, который может быть связан с ними.

Это зависит от того, какой белок вы ищете, но в целом это хорошая идея, особенно в препаративная очистка, чтобы избавиться от как можно большего количества примесей.

1:

Поскольку белки, как правило, большие и, следовательно, появляются в нижних полосах вашей (ультрацентрифугированной) фракции, вы хотите избавиться от любых нуклеиновых кислот, особенно если белок, который вы очищаете, относится к подобным Pol1, Обратная транскриптаза или любой другой фермент, участвующий в репликации / транскрипции / трансляции.

Вы можете отделить нуклеиновые кислоты, присутствующие в образце, используя ДНКазу: это полностью гидролизует ДНК в ее составные части.

Имейте в виду, существуют различные ДНКазы, все различающиеся по своему механизму и специфичности для своего субстрата. В зависимости от используемой ДНКазы, он может показать эндо- или же Экзо- нуклеазная активность …

Ближе к делу, РНКазы является более подходящим, поскольку РНК обычно находится в пределах диапазона плавучести / фракции белков и может быть связана с белком.

2:

Лизоцим: Фермент, который имеет по крайней мере две функции:

Он дегликозилирует ферменты: большинство белков, переносимых в кровотоке, гликозилированы: к ним прикреплено несколько молекул сахара. Лизоцим удалит остатки сахара.

Он также способен разрушать клеточную стенку грамположительных бактерий, вызывая их лизируют, (если вы хотите очистить белок от грамположительных бактерий)

Любые испорченные продукты, будь то нуклеиновая кислота или сахарный мусор, появятся в верхних фракциях центрифужной пробирки из-за их "более легкой" плавучести ….