В тесте ELISA, что делают первичные антитела и вторичные антитела?

В тесте ELISA, что делают первичные антитела и вторичные антитела?
Anonim

Ответ:

Это зависит от типа анализа ELISA.

Объяснение:

ELISA Иммуноферментный анализ = фермент-связанный.

Существуют разные типы анализов ELISA. Что вам нужно, это:

  • антитело с прикрепленным к нему ферментом
  • антиген, с которым связывается антитело
  • субстрат фермента, который вызывает измеримую реакцию

фермент к антителу часто присоединяется HRP (пероксидаза хрена). HRP может реагировать с различными субстратами, которые либо меняют цвет, либо излучают свет, оба измеримы.

На рисунке показан обзор Различные типы анализов ИФА. Я объясню, как они работают ниже.

Прямой ИФА

Пластина покрыта антигеном (Ag) и первичное антитело с добавлением фермента. Когда добавляется субстрат, реакция происходит и пропорциональна количеству взаимодействий антитело-антиген.

Непрямой ИФА

Опять же, пластинка покрыта антигеном и первичное антитело связывается с антигеном. вторичное антитело добавляется, что связывается с первым антителом. 2-е антитело содержит фермент, который реагирует с субстратом.

Сэндвич ELISA

Здесь участвуют два или три антитела. Захватывающее антитело прикрепляется к планшетам и связывается с антигеном. Далее следуют те же этапы, что и для прямого (только одно антитело) или косвенного (два антитела).

Конкурсный ИФА

Иногда называют ингибирование ИФА, это немного сложнее. Пластина покрыта исследуемым антигеном. первичное антитело с ферментом сначала инкубируют с образцом с неизвестной концентрацией того же антигена. Затем его добавляют в планшет, позволяя антителам, которые еще могут свободно реагировать, с антигеном на планшете. После того как комплексы антитело-антиген образца вымыты, добавляют субстрат.

Когда в неизвестном образце много антигена, будет меньше антител, свободных для связывания с планшетом = более низкий сигнал.