Что такое хроматография ионного обмена? + Пример

Что такое хроматография ионного обмена? + Пример
Anonim

Ответ:

Это процесс разделения различных белков на основе их заряда и свойств связывания с материалом.

Объяснение:

При разных рН разные белки несут разные заряды. Помещая смесь белков с установленным pH, вы можете получить смесь, которая содержит белки с различными зарядными свойствами.

Если эту смесь белков вылить на колонку, которая содержит материал с зарядом на нем, колонка будет связывать белки в противоположном заряде.

Затем вы можете использовать разные растворы, содержащие разное количество ионов, чтобы элюировать (открепить) белки из колонки.

Например, скажем, у вас была смесь белков, из которой вы хотите очистить определенный белок. Если вы знали, что при определенном рН ваш интересующий белок был положительно заряжен, вы могли бы вылить смесь на колонку, которая содержала отрицательно заряженный материал.

Все белки, которые не несут заряд или когда отрицательно заряжены, будут течь прямо через колонку. Затем вы можете высвободить свой положительно заряженный белок, затопив колонку положительными ионами, что завершит отрицательный заряд на колонке. Это соревнование тогда заставило бы Ваш белок интереса быть вымытым.

Вот пример этого происходит.

Каждый лоток содержит буфер с различной концентрацией, и, как видно из образца 175 мМ (верхний левый угол), очень мало красно-коричневого белка связалось с заряженной мембраной, так как существует конкуренция между ионами в буфере и белок для заряженных сайтов связывания на мембране (ионы в буфере "выиграли", потому что их больше и поэтому они препятствуют связыванию белка). В образце в правом нижнем углу много белка связано с мембраной, потому что есть меньше ионов, чтобы конкурировать за сайты связывания.

В этом видео вы можете увидеть анионообменную хроматографию в действии: