Почему GAPDH используется в Western Blot? + Пример

Почему GAPDH используется в Western Blot? + Пример
Anonim

Ответ:

GAPDH часто используется в качестве контроля загрузки.

Объяснение:

В Вестерн-блоттинге мы часто используем GAPDH в качестве контроля загрузки. Это означает, что, исследуя GAPDH, мы можем проверить, что у нас есть загруженное эквивалентное количество белков на разных дорожках блота.

Пример использования - скажем, у нас есть заболевание, которое, по нашему мнению, вызывает повышение уровня определенного белка в клетке. Мы собирали образец из «здоровых» клеток и другой образец из «больных» клеток. Затем мы загружали эквивалентные количества белка в обоих образцах на гель для вестерн-блоттинга.

После исследования блота на наш белок, представляющий интерес, мы обнаруживаем, что в пораженных клетках уровень белка действительно повышен (то есть более темная полоса образуется на блоте). Чтобы доказать, что это увеличение белка связано с изменением экспрессии в клетке, а не с артефактом нагрузки (то есть, более интенсивная полоса вызвана изменением экспрессии белка в клетках, а не случайно загруженной нами более из образца «болезнь», чем «здоровый»), мы также исследовали бы блот на GAPDH, чтобы показать, что уровни общего белка одинаковы в обеих дорожках.

Следовательно, делая это, мы показываем, что эквивалентный белок был загружен на двух дорожках и что изменение интенсивности полос, которое мы наблюдаем, связано с изменениями экспрессии белка для интересующего белка.