Почему мы используем отрицательный контроль в ПЦР?

Почему мы используем отрицательный контроль в ПЦР?
Anonim

Ответ:

Увидеть ниже

Объяснение:

ПЦР работает на основе ДНК-матрицы. Допустим, вы тестируете на ВИЧ (ВИЧ - это РНК-вирус, но когда он попадает в клетку, он превращается в ДНК … так что в зараженной клетке будет ДНК ВИЧ). Праймеры, которые вы используете, сделают продукт (ампликон), который соответствует части ДНК ВИЧ. Если вы видите этот ампликон, значит, у вас есть последовательность ВИЧ … но если у вас нет отрицательного контроля, у вас может быть заражение.

ПЦР чрезвычайно сентиментален. Есть много растворов, используемых в ПЦР (вода, буфер, дНТФ, фермент) … и все они могут легко загрязниться ДНК из других образцов или даже из ампликона, который был сделан в реакции, которую вы сделали вчера. Таким образом, если у вас есть образец ДНК пациента X и вы проверяете на ВИЧ с помощью ПЦР, праймеры ПЦР могут сделать продукт ДНК ДНК в образце ДНК пациента X (если у этого человека есть ВИЧ), или он может сделать его из загрязнения. Но вы не можете сказать, является ли это от загрязнения или от ВИЧ в ДНК пациентов.

Итак, вы управляете водой. В пробирку 1 вы помещаете все компоненты реакции, а для ДНК вы только добавляете воду. Это отрицательный контроль. НИЧЕГО не должно усиливаться здесь. В Tube 2 вы помещаете все компоненты реакции и ДНК пациента X. Если вы получаете продукт здесь (и ничего в Трубке 1), у пациента X, вероятно, есть ДНК ВИЧ в его / ее ДНК. Если вы получаете продукт как в пробирке 1, так и в пробирке 2, у вас есть проблема с загрязнением, и вы не можете определить, является ли ВИЧ в образце пациента следствием заболевания или заражения.

Таким образом, вы всегда управляете водой (вода вместо ДНК).